中文名稱：大鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒

本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!
規(guī)格/Packing：96T/Kit（8*12strips）/ 48T/Kit（8*6strips）
檢測范圍/Detection Range：詳見說明書

本試劑僅供研究使用  標本：血清或血漿

試驗原理：
L-Selectin/CD62L試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知L-Selectin/CD62L濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將L-Selectin/CD62L和生物素標記的抗體同時溫育。大鼠L選擇素ELISA檢測試劑盒洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中L-Selectin/CD62L的濃度呈比例關系。

自備材料
1．蒸餾水。
2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1．試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6．洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7．底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8．加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9．按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。大鼠L選擇素ELISA檢測試劑盒每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9．在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的L-Selectin/CD62L標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的L-Selectin/CD62L含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-80ng/ml

4、敏感度： 0.1 ng/ml

大鼠L選擇素ELISA檢測試劑盒使用說明書保存條件：短期4℃/長期-20℃保存
檢測方法/Method：固相捕獲法測IgM抗體、競爭法測抗體、雙抗原夾心法測抗體、間接法測抗體、競爭法測抗原、雙抗體夾心法測抗原等ELISA實驗方法
樣品類型/Sample Type：血清、血漿等其它指標樣品
血清：全血標本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。
血漿：抗凝劑推薦使用EDTA，標本采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂標本。
其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復凍融，6個月內(nèi)進行檢測，4℃保存的應在1周內(nèi)進行檢測。如果樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據(jù)實際情況，做適當倍數(shù)稀釋（建議先做預實驗，以確定稀釋倍數(shù)）。